可能原因：
1.移液器长期未校准或移液操作差
2.标准品稀释不正确或加样问题
3.引物二聚体或者扩增子具有二级结构或者非特异性扩增
4.标准曲线动态范围太小
5.模板中存在抑制剂
6.基因组DNA污染（RNA样本）
解决办法：
1.定期校准移液器或慢速移液，避免产生气泡
2.重新稀释，或重复实验
3.重新设计引物或者优化扩增程序，提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间
4.重新设计引物
5.稀释模板，或者重新制备模板
6.使用含有gDNA去除的反转录试剂盒

可能原因：
1.引物二聚体
2.未使用热启动的Taq酶或热启动Taq酶封闭效果不佳
解决办法：
1.重新设计引物或者选择产生最小信号的熔解温度峰的引物组合
2.使用热启动Taq酶或更换试剂厂家

可能原因：
反应体系污染模板
解决办法：
1.设置不同操作区域，如样品制备区、加样区和反应扩增区，避免不同步骤之间交叉污染；
2.反应体系在超净工作台内配制，使用带滤芯吸头；
3.将引物、水、试剂分装成小份，避免反复开启导致污染。

可能原因：RNA含有gDNA污染。
解决办法：使用含有gDNA去除的反转录试剂盒。

可能原因：
1.存在引物二聚体；
2.模板量过低。
解决办法：
1.建议降低引物浓度或重新设计引物；
2.提高模板量。

可能原因：
1.存在非特异性扩增
2.gDNA污染
解决办法：
1.重新设计引物或者优化扩增程序，使用两步法程序或提高退火温度
2.可通过NRT样本确认

可能原因：存在大小相近的非特异性产物
解决办法：可通过高1.5%~2%琼脂糖电泳确认

可能原因：ROX浓度与机型不匹配；
解决办法：可在仪器上将参比染料设置由ROX更改为NONE，取消ROX的校正功能，查看熔解曲线是否恢复正常。

可能原因：存在大小相近的非特异性产物；
解决办法：可通过高1.5%~2%琼脂糖电泳确认。

可能原因：未加模板，仅有引物二聚体的扩增；
解决办法：可通过电泳确认或者重复实验。