gDNA的残留量可以通过对提取的RNA进行琼脂糖凝胶电泳检测。

如果不清楚具体的含量，可以按照gDNA残留高的方法二（两步法）的步骤处理。

可以将37℃的反应时间延长至5 ~ 10 min。

说明书推荐加入量50 ng~1 μg，一般推荐1 μg加入量，如果目的基因表达量非常低，最多可以加入 5 µg Total RNA。
Total RNA如果用于miRNA反转录推荐1 μg加入量。

常用的反转录引物有：随机引物，Oligo(dT)和基因特异性引物。
随机引物：
1）结合部位：RNA的许多随机可结合部位；
2）优点：适合复杂结构和微量模板；
3）缺点：特异性低，小片段多；
4）适用的反应类型：rRNA、tRNA、真核/原核mRNA、LncRNA、cirRNA、病毒RNA。
Oligo(dT)：
1）结合部位：真核生物mRNA3’端poly(A)尾；
2）优点：可合成全长cDNA；
3）缺点：①仅扩增有polyA尾的mRNA；②对模板质量要求高；
4）适用的反应类型：真核mRNA、LncRNA、额外加Poly（A）尾的RNA。
基因特异性引物：
1）结合部位：特异性互补序列；
2）优点：特异性强，灵敏度高；
3）缺点：仅合成特定的序列；
4）适用的反应类型：序列已知的所有类型RNA、miRNA或tsRNA茎环法。

EG15133
1）组分：随机引物与Oligo(dT)已预混至预混液中；
2）优势：加样方便，反转录效率高，并保障获得更加完整的cDNA，避免3’端扩增偏好性；
3）应用场景：下游qPCR的反应类型：rRNA、tRNA、真核/原核mRNA、LncRNA、cirRNA、病毒RNA。
EG24102
1）组分：随机引物与Oligo(dT)单独提供；
2）优势：可实验的具体情况可灵活选择随机引物、Oligo(dT)或基因特异性引物进行反转录，应用场景更广；
3）应用场景：下游qPCR的反应类型：rRNA、tRNA、真核/原核mRNA、LncRNA、cirRNA、病毒RNA、序列已知的所有类型RNA、miRNA或tsRNA茎环法。下游PCR的反应类型：真核/原核mRNA。

EG24102，RTase III Primer Flexible All-in-One Mix (with dsDNase)，三代逆转录可选引物预混液（去基因组），仅适用于茎环法。

不可以，逆转录产物cDNA是混合物，除了cDNA产物以外，还有Buffer、逆转录酶、引物，同时还包含未转录的模板RNA，总RNA中的tRNA、rRNA等，都会干扰浓度测定结果。1000ng的RNA理论可以反转录1000ng cDNA。评价反转录好坏一般根据内参基因Ct值或者是否有目的基因扩增来评价。

cDNA产物可以进行电泳，但是电泳结果一般呈“弥散”现象。

提供更高的反应温度，有助于减少RNA的二级结构，提高引物的特异性结合，使用热稳定的逆转录酶，可以提高cDNA合成的效率和完整性。