拒绝“养蛊”！微生物实验防污染指南

       微生物污染，是每个分子/微生物实验者的“必修课”。它不挑资历、不看设备，稍有不慎就能让你几天的功夫付诸东流。今天我们就来聊聊，如何在这场与"看不见的敌人"的较量中，守住你的实验阵地。

一、污染的三大来源

— 知彼才能百战不殆 —

微生物实验的"敌人"无处不在，主要来自三个渠道：

环境——空气中漂浮的尘埃和微生物、实验台面的残留物、设备没定期清洁。

人员——实验人员是 "最大的移动污染源"。皮肤、头发、衣物上都带着微生物，手上的细菌尤其多。你感冒了打个喷嚏，就可能把细菌和支原体"送"进培养基。

器材——瓶子口、移液器、吸头、培养皿等清洗消毒不彻底。

记住一个扎心的事实：污染不会跟你商量，它只会悄悄来，然后毁掉你所有的努力。

二、硬件准备

— 把你的"战场"打扫干净 —

1. 无菌室 / 超净台的准备

无菌室通常由更衣间、缓冲间和操作间组成，需要定期消毒，可用过氧乙酸、臭氧或甲醛熏蒸等方式。

使用超净台的核心步骤：

台面消毒：每次实验前，先用 75% 乙醇擦拭台面——顺序从上到下、从里向外。

紫外消杀：打开超净台紫外线灯，需照射至少 30 分钟，然后关闭紫外灯、开启照明灯、风机。

通风待用：风机运行 10-15 分钟，待台内空气净化稳定后再开始操作。

2. 物品的传入——每一件都要"安检"

所有带入超净台的物品——培养基瓶、枪头盒、离心管、培养皿——都必须先用 75% 乙醇喷洒消毒再放入。

摆放大有讲究：

3. 培养基与器材的灭菌

微生物实验离不开彻底灭菌。常用灭菌方式包括：

三、人员准备

— 你自己就是最大的变量 —

1. 着装——"四套"是底线

操作前必须穿戴实验服口罩帽子手套。

口罩防止呼出气流中的微生物掉落。帽子要把所有头发完全收进去。有感冒、咳嗽等呼吸道症状时，能不上就尽量不上微生物实验。

2. 手部消毒

洗手是第一步，进入无菌室前用肥皂或洗手液彻底清洗。戴上手套后，用 75% 乙醇喷洒双手至全部湿润，揉搓至酒精挥发。

3. 动作规范——"轻、稳、准"

进入无菌室后，减少走动，避免不必要的人员流动。操作前半小时内不要清扫地面，防止扬尘。操作中禁止谈笑、咳嗽、打喷嚏，动作要轻缓，减少扰动气流。

四、核心操作规范

— 每一招都是防线 —

1. 酒精灯的"正确打开方式"

在微生物实验中，酒精灯是"镇宅之宝"。火焰可在其周围约 10 cm 范围内形成一个无菌区，操作应始终在此区域内进行。

关键操作：

a. 接种环在火焰灼烧灭菌　b. 烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管　c. 打开试管胶塞后，瓶口灼烧灭菌

2. 接种操作——"四步法"

以最经典的斜面接种为例：

斜面接种无菌操作

3. 倒平板——"烫"但要"稳"

配制好的培养基灭菌后，待冷却至约 50℃（手背触碰瓶身不烫手时）再倒平板。

倒平板时的防污染要点：

倒平板操作示意图

4. 分区操作——"上不下、内不杂"

超净台内部应遵循气流逻辑布局：

使用移液器时，吸头不要碰触容器瓶口外沿，每吸一种液体都要换新吸头。

五、培养过程中的防污染

— 接种完成 ≠ 万事大吉 —

接种完成并不等于万事大吉，培养过程中的污染防控同样重要。

1. 平板的"倒置培养"

接种后的平板必须倒置放入培养箱。原因有二：

2. 培养箱管理

CO₂ 培养箱或恒温培养箱需要定期清洁（至少每 12 个月一次），水盘中的水要使用无菌蒸馏水并定期更换。不要频繁开关培养箱门。

3. 污染的"早发现"

每日观察培养物时留个心眼：

六、善后工作

— 善始善终—

实验结束后的操作和实验前一样重要：

无菌是一种习惯

无菌操作技术不是一套写在墙上的规定，

而应该内化成每一个微生物实验者的肌肉记忆。

历史经验告诉我们——一次侥幸，一次污染。

获得纯净培养物的关键，说到底就是一句话：

对每一个细节都保持敬畏。