基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据DNA片段与线性化载体末端的15~25 nt 同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意载体的任意位点，载体自连背景极低，是一种简单、快速、高效的DNA定向克隆技术。
       DNA Assembly Mix Smart单次反应可完成1~15个片段的组装，最快仅需1 min即可完成单片段重组，且阳性率高于95%。通过优化缓冲液组分与酶的配比，DNA Assembly Mix Smart与DNA Assembly Mix Ultra相比显著提升了对未纯化PCR产物的耐受性及产品稳定性，无惧氧化、冻融影响。此外，DNA Assembly Mix Smart与DNA Assembly Mix Ultra同样使用HiFi Taq DNA Ligase，连接保真度高。

一、耐受性升级：兼容未纯化PCR产物

相对于EG24204, EG26208 DNA Assembly Mix Smart 更支持多品牌高保真PCR未纯化产物直接组装。

图1 EG26208与EG24204：多品牌高保真PCR未纯化产物单/多片段组装的转化子及阳性率比较

注：以上PCR产物均没有明显杂带，否则阳性率会显著下降。

基于EG24110与竞品W未纯化PCR产物测试，相对于其他品牌，EG26208 DNA Assembly Mix Smart对未纯化PCR产物的耐受性在各场景中表现突出。

图2 多品牌无缝克隆试剂：两种未纯化PCR产物单、多片段组装的转化子数对比

二、连接效率高：可高效连接1~15个片段

使用EG26208 DNA Assembly Mix Smart 进行LacZ基因15片段实验，蓝白斑筛选结合菌落PCR验证，组装菌落数与阳性率表现优异。

图3 EG26208组装15个片段的平板菌落示意及菌落PCR结果

三、底物范围宽：常规底物投入量的1/5~5倍

图4 EG26208在0.006~0.15pmol载体用量范围内有较好的连接效果

注：片段与载体的摩尔比均为2:1。

四、稳定性强：无惧氧化、反复冻融

EG26208 DNA Assembly Mix Smart在冻融20次条件下、高温+氧化双重胁迫下连接效率无下降。

图5 EG26208分别在冻融20次或高温+氧化处理后的转化数据

-20℃保存 2 年